色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數的柱效；對于同系物分析，只要500即可；對于較難分離物質對則可采用高達2萬的柱子，因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。 在選擇色譜柱規格時應考慮下列因素：① 色譜柱內徑：樣品的上樣要與色譜柱的交叉截面面積相對稱，要選擇色譜柱的內徑要適合于樣品的上樣量。② 填料的粒徑：越小的粒徑具有越高的柱效，但是價格更高，并且帶來更高的柱壓，要求設備的硬件具備更高的壓力耐受性。在被測組分的色譜峰與其它色譜峰非常靠近時，就需要更高的柱效，此時較小粒徑的色譜填料就顯得非常有用。相反，越大的粒徑則柱效越低，但價格也相對較低，同時對設備的要求也不高。③ 色譜柱長度：越長的色譜柱具有越高的柱效和更高的樣品承載量，但是柱壓將會更高，同時分離時間可能會更長